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新型冷台干冻法制作病理切片的实践

时间:2019-10-08

  摘    要: 目的 探讨如何提高常规病理切片质量的技术和方法,防止组织冷冻过度影响切片质量及蜡块水分的进入。方法 收集2017年3月~12月南京市妇幼保健院病理科常规制片中的蜡块4000个,每日选取类似的组织随机平均分为两组:湿冻法组共2000个蜡块都使用传统规范的冷台冷冻法进行制片;干冻法组共2000个蜡块,切片时都将蜡块反过来进行冷台冷冻法制片。对比两组制片的效果及切片质量不良发生率。结果 干冻法组制片中各组织切片完整、厚薄均匀,无裂隙、皱褶且蜡块组织表面无水分的进入。而湿冻法组中有一些组织切面不完整,有裂隙和颤痕,且切片的时候蜡块组织表面易有水分的进入,蜡块组织表面时有发白现象,尤其是以宫内物以及一些含血较多的组织比较明显。干冻法组切片质量不良发生率低于湿冻法组(1.90%vs 7.80%),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 使用冷台“干冻法”进行制片更好的提高了切片的质量,而且有效的避免了蜡块组织水分的进入,保证了切片质量和蜡块的保存。

  关键词: 干冻法; 冷台; 切片; 质量分析;

  Abstract: Objective To explore techniques and methods for improving the quality of conventional pathological sections to prevent tissue freezing from affecting the quality of the sections and the moisture ingress of the wax blocks. Methods A total of 4000 wax blocks were collected from the routine preparations of the Department of Pathology, Nanjing Maternal and Child Health Hospital from March to December 2017. The daily average of similar tissues was randomly divided into two groups: 2000 freezers were used. The traditional standard cold table freezing method is used for tableting; the dry freezing method group has a total of 2000 wax blocks, and the wax blocks are reversely processed for cold plate freezing. The effect of the two groups of tablets and the incidence of poor slice quality were compared. Results The tissue sections in the dry frozen method were intact, uniform in thickness, free of cracks, wrinkles and no moisture on the surface of the wax block. However, some tissues in the wet freezing method are incomplete, with cracks and trembling marks, and the surface of the wax block is easy to enter when the slice is formed, and the surface of the wax block is whitish, especially in the uterus. And some tissues with more blood are more obvious. The incidence of poor quality of the dry frozen group was lower than that of the wet frozen group (1.90% vs 7.80%) , the difference was statistically significant ( P<0.05) . Conclusion The use of cold table "dry freeze method" for tableting better improves the quality of the slice, and effectively avoids the entry of wax block tissue moisture, ensuring the quality of the slice and the preservation of the wax block.

  Keyword: Dry freezing method; Cold table; Slicing; Quality analysis;

  常规制片中脱完水的蜡块要保存15~30年,尤其常规检查后要进行其他的免疫及分子检测,因此防止水分的再次进入是保证蜡块完整性的前提[1]。有些组织在脱完水后,如后期有水分的进入,再次进行脱水必然会造成组织的破坏以及影响其他检查,不能为临床提供准确的检查结果。为此,本研究尝试一种新的冷台干冻法进行制片,旨在证明其是否可以在提高制片质量的同时,也能有效防止水分进入蜡块中的组织。

  1 、材料与方法

  1.1、 一般材料

  收集2017年3月~12月南京市妇幼保健院病理科常规制片中的蜡块4000个,每日选取类似的组织采用随机数字表法平均分为湿冻法组和干冻法组,每组2000个。
 

新型冷台干冻法制作病理切片的实践
 

  1.2、 仪器

  莱卡手动2235切片机、普瑞斯星B型包埋机(PMB-B型冷台)、配套的一次性羽毛刀片及Dako的coverstainer染封一体机等。

  1.3 、方法

  1.3.1、 湿冻法组

  采用传统规范的冷台冷冻法进行制片。将待切蜡块先用旧刀初修至最大面,按顺序摆放在冷台上面,组织面朝下跟冷台相接触,待冷台冷却后再切片。

  1.3.2 、干冻法组

  采用新的干冻法。将待切蜡块先用旧刀初修至最大面,按顺序摆放在冷台上面,组织面朝上,蜡块背面与冷台接触,待冷台冷却后再切片。

  两组蜡块切片、烤片后进行常规染色, 二甲苯脱蜡, 梯度酒精洗二甲苯, 水洗, 苏木素, 水洗, 返蓝, 伊红, 梯度酒精脱水, 二甲苯透明, 中性树胶封固[2]。

  1.4、切片评价

  将两组切片及蜡块交由两位不了解分组信息的病理医生和高年资的技术员观察, 然后按照江苏省诊断和技术规范对其进行评价[3]。比较两组各类标本切片质量发生情况 (切片不完整、颤痕、裂隙) 和切片质量不良发生率。

  1.5、 统计学方法

  应用SPSS 19.0统计软件进行统计分析,计数资料以(n,%)表示,采用χ2检验。P<0.05为差异具有统计学意义。

  2、 结果

  干冻法组中,组织切面更平整,组织更完整,甚至有的组织更好切点,有效的提高了常规的切片质量,见图1~图4。本研究分别选取了妇产科常见的几种不同的瘤体组织,包括宫颈、宫内膜、子宫肌瘤/腺肌瘤、含血多的组织(宫内物/输卵管异位妊娠)等疾病组织,见表1。干冻法组中只出现了38例发生不同的组织部分不完整及颤痕、裂隙现象,发生率仅为1.90%;湿冻法组中有156例发生不同的组织不完整及颤痕、裂隙现象,发生率为7.80%。其中宫颈、宫内膜和含凝血块多的组织发生切片质量不好的概率最高,干冻法组切片质量优于湿冻法组,差异有统计学意义(P<0.05)。

  图1 含血宫内物切片
图1 含血宫内物切片

  图2 宫内膜切片
图2 宫内膜切片

  图3 子宫肌瘤切片
图3 子宫肌瘤切片

  图4 宫颈切片
图4 宫颈切片

  表1 两种不同冷冻方法切片的制片质量比较
表1 两种不同冷冻方法切片的制片质量比较

  3 、讨论

  3.1 、常规石蜡切片的基本条件及注意事项

  (1) 做好准备工作:首先切片机、一次性刀片、冷台等设备要一致且一次性刀片要及时更换,石蜡选择相同品牌及熔点等,切片前要先打开冷台预冷。 (2) 一定要把蜡块初修好,再放在预冷好的冷台上冷冻。 (3) 切片手法要熟练,技术员要熟练掌握机器的性能和切片方法,熟练掌握不同组织的切法和其他条件,只有不断实践才能逐步积累经验。 (4) 石蜡切片时应根据组织的面不同实时调整蜡块的切面及厚度,防止切片产生颤痕和切片不完整等现象。 (5) 要求病理取材医师准确取材,对组织的大小、厚度等要控制好,并要求技术员认真仔细观察不断总结经验才能制作出良好切片,保证制片质量。

  3.2 、影响组织切片质量的因素

  (1) 温度:石蜡切片是利用冷台降低组织蜡块表面的温度[4]切出完整的切片,再用温差的表面张力进行漂片。但是冷冻时冷台的温度不能够太低也不能太高,太低了组织冷冻过度导致组织过硬,过脆,切出的组织会有颤痕、裂隙或不全等现象。 (2) 固定:标本较大或组织脂肪较多没有切开固定导致的固定不良,一般要提前把标本切开固定,延长固定时间。 (3) 取材:医生取材时要根据具体要求来按照标准取材,一般为5 cm×4 cm×3 cm,不宜过大,不然组织脱水不够会导致组织切不全。 (4) 脱水:脱水机试剂要定期更换,保证脱水试剂的浓度。 (5) 包埋:根据组织面不同包埋方向应一致,切片时组织牵拉的力度保持相同,不容易产生颤痕。 (6) 切片:根据组织不同调整切片厚度及方向,切片手法要熟练。 (7) 漂片:适当加大温差,使组织漂片时容易展平。 (8) 染色封片:定期更换试剂,保证试剂浓度。红蓝对比适当,封片无溢胶、气泡。

  决定组织切片质量优良的因素很多,除了以上所述,蜡块表面的冷冻温度是关键因素之一。通过将蜡块反过来冷冻的干冻法制作的切片,本研究观察发现在具体切片环节与传统的湿冻法无明显差异。经切片染色后,镜下观察细胞浆呈淡红色,细胞核呈蓝紫色,核浆对比分明,色泽鲜艳,无皱褶,组织结构完整、清晰,层次分明。其质量与传统湿冻法组不相上下,甚至在某些方面胜过传统的湿冻法组织切片。而新的干冻法中将蜡块组织面朝上,使其组织面冷冻时不会冷冻过度,切片不易产生颤痕及裂隙[5],提高了组织切片的质量。而且冷台上时间长了会有霜凝结,新的干冻法中可减少蜡块中组织接触水分,不易使组织变坏,保证了蜡块长时间的保存。尤其是宫颈、肌瘤等组织本身组织纤维较多,冷冻过度会使蜡块组织过硬,切时更容易发生颤痕现象。宫内膜及含血块多的组织如果冷冻过度会导致组织切起来很脆[6],容易使组织腺体产生裂隙及组织不完整现象。新的干冻法中很好的避免了组织颤痕、腺体裂隙及组织不完整现象的产生,有效的提高了切片质量,保证了医疗质量,降低了医生的诊断风险,保证了诊断的准确性。

  参考文献

  [1] 陈洁.浅析临床病理技术室常规出片前质量控制措施[J].医院管理, 2017, 17 (77) :150-151.
  [2] 武巧伶, 魏春娥, 苗金红.浅谈HE染色方法在临床病理诊断中的作用[J].中外医学研究, 2013, 11 (29) :147.
  [3] 吴王飞, 陈迅, 程雪, 等.加热法预防快速冷冻切片脱片的应用体会[J].医学信息, 2015, 28 (7) :45-46.
  [4]范玲丽.病理制片质量控制的探讨及体会[J].临床与实验病理学杂志, 2016, 32 (7) :823-824.
  [5] 陈岚, 田燕晓, 刘一靖, 等.病理技术常规制片的问题几解决方案[J].医学理论与实践, 2018, 31 (12) :1879-1880.
  [6]刘宪军.病理制片质量控制的常见差错及应对措施[J].中国当代医药, 2014, 21 (22) :148-149.

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